德國Postnova公司 發佈了一新應用,電荷型非對稱場流分離技術 (EAF4, Electrical Asymmetrical Flow Field-Flow Fractionation) 和體積排除色譜法(SEC / GPC, Size Exclusion Chromatography/ Gel Permeation Chromatography)對於單株抗體的生物物理特質分析適用性比較。

分析上使用美國國家標準與技術研究院 (NIST) 的參考單株抗體 (RM 8671 mAb)來 用於比較 EAF4-UV-MALS 與 SEC-UV-MALS 對抗體的分離效果、聚合定量和樣品回收率等數據。SEC-UV-MALS 技術。NIST mAb抗體常被使用於蛋白質藥物開發性的代表性的測試分子。

此應用文章說明了 EAF4 電荷型非對稱場流分離模組如何同時測量抗體和蛋白質的大小和表面電荷(電泳, electrophoretic mobility)特性。如果使用SEC色譜法分析,分析數據未檢測到聚集分子,但使用EAF4 電荷型非對稱場流分離,可明顯檢測到占注射質量的10%含量的蛋白質/抗體的聚合體。

 

Fractogram of Antibody obtained from AF4-UV @ 280 nm
 
結論
研究人員得出結論是,稱場流分離技術使用開放式通道設計,不受SEC/GPC管柱填充物大小限制,比SEC/GPC得到更好的樣品回收率(recovery),這在尋求量化少量聚合時尤為重要的分析關鍵。

Postnova EAF4 分析技術將電荷和非對稱場流 FFF 獨特優點結合在一個系統中。在 EAF2000 系統中 - 電荷和場流同時在 FFF 通道上應用,根據電泳流動性質,將不同大小顆粒和不同帶電電荷粒子一一分離。將這兩種強大的分離技術結合在一個平台中,為蛋白質、抗體和病毒以及環境分析、帶電奈米粒子或聚合物的特性分析打開了大門,是目前難以用其他分離技術有效分離奈米粒子或聚合物的解決手段。


References: Postnova.com. (2019). Comparative Analysis of a Complex Monoclonal Antibody - Postnova Analytics GmbH.

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